2 × Taq PCR MasterMix Ⅱ

Жогорку эффективдүүлүк жана жогорку стресстик каршылык менен тез ПКР премикси.

2 × Taq PCR MasterMix Ⅱ-бул ДНК шаблону менен праймерден башка ПЦР реакциясындагы бардык маанилүү бөлүктөрү бар жаңы оптималдаштырылган жана колдонууга даяр 2 × ПТР премикси.

Cat. Жок Packing Size
4993001 1мл
4993002 5x1ml
4992912 20x5x1 мл
4992913 5 × 1мл
4992920 20 × 5 × 1мл
4992921 20 × 5 × 1мл

Продукциянын чоо -жайы

Эксперименталдык мисал

FAQ

Продукт тэгдери

Өзгөчөлүктөрү

■ Жогорку күчөтүү эффективдүүлүгү: ДНКнын ар кандай өлчөмдөгү фрагменттери (5 кбдан төмөн) жана булактары эффективдүү түрдө көбөйтүлүшү мүмкүн.
■ Жогорку сезгичтик: 10 pg максималдуу фрагменттерди геномдук шаблондордон күчөтсө болот.
■ Жогорку стресске каршылык: Киргизилген шаблон/бактериялык маданият сыяктуу кирдүүлүгү жогору болгон шаблондор үчүн, максаттуу фрагмент оңой эле көбөйтүлүшү мүмкүн. Полимераздын активдүүлүгүнө кайра -кайра тоңуу жана ээрүү таасир этпейт.
■ Тиркемелер үчүн ыңгайлуу: Реакция системасы оңой жана тез даярдалды. Күчөтүлгөн фрагментте ТА клондоштуруу үчүн ыңгайлуу болгон 3 'dA-overhang бар.

Спецификация

Түрү: Taq ДНК полимераза
Үлгү: Тазаланган/одоно алынган шаблон/бактериялык маданият
Калып: > 10 б
Фрагменттин өлчөмү: <5 kb
Колдонмолор: ДНК фрагменттеринин ПТРди күчөтүүсү, ДНКнын этикеткасы, праймердин узартылышы, ырааттуулукту аныктоо, ири масштабдагы гендерди аныктоо, ПТРдын жарым сандык эксперименттери, ДНКнын изин табуу ж.

Бардык буюмдар ODM/OEM үчүн жекече болот. Чоо -жайын билүү үчүн,сураныч, Customized Service (ODM/OEM) чыкылдатыңыз


  • Мурунку:
  • Кийинки:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
     2×Taq PCR MasterMix Ⅱ Сүрөт 1. Реагенттердин стресске туруштук берүүсүн аныктоо үчүн TIANGEN Taq MasterMix II жана Тапшыруучу ТРден жалпы Taq Mix тарабынан түрдүү булактардан алынган шаблондор күчөтүлгөн. Жыйынтыктар TIANGEN продуктылары чийки геномдук шаблондордон жана бактериялык маданияттан максаттуу фрагменттерди күчөтө аларын көрсөтүп турат жана стресске туруштук берүүчү Транспорт берүүчү ТРга караганда жакшыраак. A: Чийки геномдук шаблон TIANGEN TIANcombi DNA Lyse & Det PCR Kit тарабынан алынган. Prp/DN: Чийки экстракция жана адамдын кан үлгүлөрүн аныктоо. Райс: Чийки казып алуу жана күрүч үлгүлөрүн аныктоо. Б: Колония ПТР. ПТР фрагменти 700 а.к.
    М: TIANGEN Маркер III
     2×Taq PCR MasterMix Ⅱ Ар түрдүү булактардан жана ар кандай узундуктагы шаблондор үчүн универсалдуу
    Figure 2. Ар кандай булактардын жана узундуктардын фрагменттери TIANGENдин жардамы менен күчөтүлгөн Taq MasterMix II (A) жана жөнөкөй Taq Жеткирүүчү TK (B), Жеткирүүчү TR (C), Жеткирүүчү V (D) жана Жеткирүүчү G (E) аралашмасы. Натыйжалар көрсөткөндөй, TIANGEN продуктуларынын комплекстүү иштеши күчөтүү жөндөмдүүлүгү, өзгөчөлүгү жана универсалдуулугу боюнча эң жакшы.

    2-3: Райс геномдук ДНК шаблону (694 bp, 2258 bp);

    4: Пахтанын геномдук ДНК шаблону (200 bp);

    5: Escherichia coli геномдук ДНК шаблону (2298 bp);

    6-7: Чычкан геномунун ДНК шаблону (1 кб, 2 кб);

    8-10: Келемиштердин геномдук ДНК шаблону (1 кб, 2 кб, 2080 б.п.);

    11-18: Адам геномунун ДНК шаблону (300 bp, 448 bp (GC%: 74,8%), 1100 bp, 750 bp,

    1000 а.к., 1090 кан (GC%: 70.4%), 2 кб, 4 кб)

     2×Taq PCR MasterMix Ⅱ Жогорку сезимталдык
    Figure 3. Келемиштин жана адамдын ДНК сыныктарынын ар кандай концентрациялары TIANGENдин жардамы менен күчөтүлгөн Taq MasterMix II (A), кадимки Taq Жеткирүүчү V (B) жана Жеткирүүчү TK (C) аралашмасы, тиешелүүлүгүнө жараша, күчөтүү сезгичтигин аныктоо үчүн. Натыйжалар көрсөткөндөй, TIANGEN продукту 0,01 нгге чейин геном шаблонун максаттуу фрагментин күчөтө алат жана анын сезгичтиги V жана TK.M: TIANGEN Marker III, N: NTCTemplate киргизүү 1-8 продуктуларына караганда жакшыраак. : 200 ng, 100 ng, 50 ng, 20 ng, 10 ng, 1 ng, 0.1 ng, 0.01 ng.
    С: Күчөтүүчү топтор жок

    A-1 шаблону

    ■ Калыпта протеин кошулмалары же Taq ингибиторлору бар, ж.

    ■ Калыптын денатурациясы толук эмес - Денатурация температурасын тийиштүү түрдө жогорулатуу жана денатурация убактысын узартуу.

    ■ Калыптын деградациясы ——Калыпты кайра даярдаңыз.

    A-2 праймер

    ■ Праймерлердин сапаты начар --— Праймерди кайра синтездөө.

    ■ Праймердин бузулушу - Консервациялоо үчүн жогорку концентрациядагы праймерлерди кичине көлөмгө бөлүңүз. Бир нече жолу тоңдуруудан жана эритүүдөн же узак мөөнөттүү 4 ° C криоконсервациядан алыс болуңуз.

    ■ Праймердин туура эмес дизайны (мис. Праймердин узундугу жетишсиз, праймердин ортосунда димер пайда болгон ж.б.)

    A-3 Mg2+концентрация

    ■ Mg2+ концентрациясы өтө төмөн - Мнгди туура көбөйтүү2+ концентрация: Mg оптималдаштыруу2+ оптималдуу Mg аныктоо үчүн 0,5 мм аралыгы менен 1 мМден 3 ммге чейинки реакциялар сериясы аркылуу концентрациялоо2+ ар бир шаблон жана праймер үчүн концентрация.

    A-4 Күйүү температурасы

    ■ Тартуунун жогорку температурасы праймер менен шаблондун байланыштырылышына таасир этет. —— Күйүүчү температураны төмөндөтүңүз жана 2 ° C градиенти менен абалды оптималдаштырыңыз.

    A-5 Узартуу убактысы

    ■ Кыска узартуу убактысы —— Узартуу убактысын жогорулатуу.

    С: Жалган позитив

    Феноменалар: Терс үлгүлөр ошондой эле максаттуу ырааттуулук тилкелерин көрсөтөт.

    А-1 ПТРдин булганышы

    ■ Максаттуу ырааттуулуктун же күчөтүүчү продуктулардын кайчылаш булганышы - Терс үлгүдөгү максаттуу ырааттуулукту камтыган үлгүнү пипеткага түшүрбөө же центрифуга түтүгүнөн төгүп албоо. Реактивдер же жабдуулар болгон нуклеин кислоталарын жок кылуу үчүн автоклавда болушу керек жана булгануунун бар -жогун терс контролдук эксперименттер аркылуу аныктоо керек.

    ■ Реагенттердин булганышы - Реагенттерди бөлүп, төмөнкү температурада сактаңыз.

    A-2 Primer

    ■ Mg2+ концентрациясы өтө төмөн - Мнгди туура көбөйтүү2+ концентрация: Mg оптималдаштыруу2+ оптималдуу Mg аныктоо үчүн 0,5 мм аралыгы менен 1 мМден 3 ммге чейинки реакциялар сериясы аркылуу концентрациялоо2+ ар бир шаблон жана праймер үчүн концентрация.

    ■ Туура эмес праймер дизайны жана максаттуу ырааттуулук максаттуу эмес ырааттуулук менен гомологияга ээ. ——Кайта конструкциялоочу праймерлер.

    С: спецификалык эмес күчөтүү

    Феноменалар: ПТРдин күчөтүү тилкелери күтүлгөн өлчөмгө карама-каршы келет, же чоң, же кичине, же кээде спецификалык күчөтүү тилкелери да, спецификалык эмес күчөтүү тилкелери да пайда болот.

    A-1 Primer

    ■ Праймердин өзгөчөлүгү начар

    ——Кайта конструкциялоочу праймер.

    ■ Праймердин концентрациясы өтө жогору —— денатурациянын температурасын туура жогорулатуу жана денатурация убактысын узартуу.

    A-2 Mg2+ концентрация

    ■ Mg2+ концентрация өтө жогору —— Mg2+ концентрациясын туура азайтуу: Mg оптималдаштыруу2+ оптималдуу Mg аныктоо үчүн 0,5 мм аралыгы менен 1 мМден 3 ммге чейинки реакциялар сериясы аркылуу концентрациялоо2+ ар бир шаблон жана праймер үчүн концентрация.

    А-3 Термостабилдүү полимераза

    ■ Ферменттин ашыкча өлчөмү ——Ферменттин көлөмүн туура 0,5 У аралыкта азайтуу.

    A-4 Күйүү температурасы

    ■ Күйгүзүү температурасы өтө төмөн —- Тиешелүү түрдө күйгүзүү температурасын жогорулатыңыз же эки баскычтуу күйүү ыкмасын колдонуңуз

    А-5 ПТР циклдери

    ■ ПТР циклдеринин өтө көп болушу - ПТР циклдеринин санын азайтуу.

    С: Жабык же шыбак

    A-1 Primer—— начар специфика —— праймерди кайра долбоорлоо, анын өзгөчөлүгүн жогорулатуу үчүн праймердин ордун жана узундугун өзгөртүү; же Киргизилген ПТРди жасаңыз.

    A-2 үлгүсү ДНК

    —–Калып таза эмес - шаблонду тазалаңыз же ДНКны тазалоочу комплекттер менен бөлүп алыңыз.

    A-3 Mg2+ концентрация

    ——Мг2+ концентрация өтө жогору —— Мгди туура азайтуу2+ концентрация: Mg оптималдаштыруу2+ оптималдуу Mg аныктоо үчүн 0,5 мм аралыгы менен 1 мМден 3 ммге чейинки реакциялар сериясы аркылуу концентрациялоо2+ ар бир шаблон жана праймер үчүн концентрация.

    A-4 dNTP

    ——ДНТПлардын концентрациясы өтө жогору —ДНТПнын концентрациясын тийиштүү түрдө азайтыңыз

    A-5 Күйүү температурасы

    ——Күйүү температурасы өтө төмөн ——Жуууу температурасын тийиштүү түрдө жогорулатыңыз

    A-6 циклдери

    ——Ото көп цикл ——Циклдин санын оптималдаштыруу

    С: 50 мкл ПТР реакция системасына канча шаблон ДНК кошулушу керек?
    ytry
    С: Узун фрагменттерди кантип көбөйтүү керек?

    Биринчи кадам - ​​ылайыктуу полимеразаны тандоо. Кадимки Taq полимеразасы 3'-5 'экзонуклеаз активдүүлүгүнүн жоктугунан текшере албайт, жана дал келбөөчүлүк фрагменттердин кеңейтүү эффективдүүлүгүн төмөндөтөт. Ошондуктан, кадимки Taq полимеразасы 5 кбдан чоңураак максаттуу фрагменттерди эффективдүү түрдө күчөтө албайт. Атайын модификациясы же башка жогорку ишенимдүүлүк полимеразасы бар так полимеразасы узартуунун эффективдүүлүгүн жогорулатуу жана узун фрагменттин күчөтүлүшүнүн муктаждыктарын канааттандыруу үчүн тандалышы керек. Мындан тышкары, узун фрагменттерди күчөтүү праймер дизайнын, денатурация убактысын, узартуу убактысын, буфердик рН ж. Калыптын бузулушуна жол бербөө үчүн, 94 ° С денатурация убактысы циклде 30 сек же андан азга чейин кыскартылышы керек, ал эми күчөтүүдөн мурун температураны 94 ° Сге чейин көтөрүү убактысы 1 мүнөттөн аз болушу керек. Мындан тышкары, узартуу температурасын болжол менен 68 ° Сге орнотуу жана узартуу убактысын 1 кб/мин ылдамдыгына ылайык долбоорлоо узун фрагменттердин эффективдүү күчөтүлүшүн камсыздай алат.

    С: ПТРдин күчөтүү ишенимдүүлүгүн кантип жакшыртуу керек?

    ПТРди күчөтүүнүн каталык ылдамдыгы ар кандай ДНК полимеразаларын жогорку ишенимдүүлүк менен азайтууга болот. Буга чейин табылган бардык Taq ДНК полимеразаларынын ичинен Pfu ферментинин эң төмөнкү ката ылдамдыгы жана эң жогорку ишенимдүүлүгү бар (тиркелген таблицаны караңыз). Фермент тандоодон тышкары, изилдөөчүлөр реакция шарттарын оптималдаштыруу аркылуу ПТР мутация ылдамдыгын андан ары төмөндөтө алышат, анын ичинде буфердик курамды оптималдаштыруу, термостабилдүү полимеразанын концентрациясы жана ПТР циклинин санын оптималдаштыруу.

    Кабарыңызды бул жерге жазыңыз жана бизге жөнөтүңүз