ГМО өсүмдүктөрдү алуу жана күчөтүү үчүн комплект

Өзгөчө ГМО өсүмдүгүн алуу жана трансгендик ПТРди аныктоо үчүн ылайыктуу.

ГМО өсүмдүктөрүн алуу жана күчөтүү үчүн комплект ГМО өсүмдүктөрүн ПТР аркылуу аныктоо үчүн атайын иштелип чыккан. Комплекстин А бөлүгүндө камтылган уникалдуу лизис буфери нуклеин кислоталары жана белоктор сыяктуу байланышкан компоненттерди чыгаруу үчүн негизги өсүмдүктөрдүн - буудайдын, жүгөрүнүн, күрүчтүн, пахтанын жана соянын ткандарын атайын лизиге алат. Фенол/хлороформ экстракциясы конкреттүү RNase менен айкалышып, РНК, белок жана металл иондору сыяктуу кошулмалары жок, жогорку тазалыктагы геномдук ДНКны тазалай алат. Тазаланган ДНК кийинки ПТРди аныктоодо колдонулушу мүмкүн. Комплекстин В бөлүгү-бул 2 × ГМО ПТР буферин жана ГМО ДНК Полимеразаны камтыган эки компоненттүү жөнөкөй ПТР реакция системасы. ГМО ДНК Полимераза - антителолор менен өзгөртүлгөн термостабилдүү полимераза. 2 × ГМО ПТР буферинде MgCl сыяктуу ар кандай компоненттер бар2, dNTPs, ПТР реакция стабилизатору, оптимизатор жана күчөткүч 2 × ГМО концентрациясында. Бул тез жана жөнөкөй иштөөнүн артыкчылыктарына ээ, жогорку сезимталдык, күчтүү спецификация, жакшы стабилдүүлүк ж.

Cat. Жок Packing Size
4992905 200 rxn

 

 


Продукциянын чоо -жайы

Эксперименталдык мисал

FAQ

Продукт тэгдери

Өзгөчөлүктөрү

■ Кеңири колдонуу: Бул комплект ГМОнун беш негизги өсүмдүгүнөн жогорку сапаттагы геномдук ДНКны ала алат.
■ Жөнөкөй жана тез: ГМО түшүмүнүн геномдук ДНКсын алуу 2 сааттын ичинде бүтүшү мүмкүн. Муздатуучу чоң центрифугалардын кереги жок, приборлорго жана жабдууларга талаптар төмөн. Изилдөө мекемелеринин бардык деңгээлдеринде ГМО өсүмдүктөрүн тез геномдук ДНК алуу үчүн ылайыктуу.
■ Жогорку эффективдүүлүк жана спецификалуулук: антитело-модификацияланган Taq полимеразанын уникалдуу буфери кадимки Taq полимеразага караганда конкреттүү болгон эффективдүү полимераздык күчөтүүнү камсыз кылат.

Колдонмолор

Бул комплект буудай, жүгөрү, күрүч, пахта жана соя сыяктуу негизги ГМО өсүмдүктөрүнөн жогорку сапаттагы геномдук ДНКны бөлүп ала алат жана ГМО өсүмдүктөрүндө трансгендик ПТР табууну аткара алат.

Бардык буюмдар ODM/OEM үчүн жекече болот. Чоо -жайын билүү үчүн,сураныч, Customized Service (ODM/OEM) чыкылдатыңыз


  • Мурунку:
  • Кийинки:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental Example ДНКнын геномдук экстракциясы
    Геномдук ДНК экстракциясы 100 мг күрүч, жүгөрү, соя, пахта жана буудайдын жалбырактарында жүргүзүлгөн. эксперимент жолу кайталады. Жалпы 100 мкл элюенттен 3 мкл ДНК бир тилкеге ​​жүктөлдү.
    Агароз гелинин концентрациясы 2%ды түзгөн. Электрофорез 6 В/см астында 20 мүнөт аткарылган.
    D15000: TIANGEN D15000 ДНК маркер.
    Experimental Example ПТР аныктоо
    Күрүч, жүгөрү, соя, пахта жана буудайдын геномдук ДНКсы күчөтүлгөн. эксперимент жолу кайталады. Жалпы 20 мкл реакция системасынан 6 мкл бир тилкеге ​​жүктөлдү.
    Агароз гелинин концентрациясы 2%ды түзгөн. Электрофорез 6 В/см астында 20 мүнөт аткарылган.
    D15000: TIANGEN D15000 ДНК маркер.
    С: Күчөтүүчү топтор жок

    A-1 шаблону

    ■ Калыпта протеин кошулмалары же Taq ингибиторлору бар, ж.

    ■ Калыптын денатурациясы толук эмес - Денатурация температурасын тийиштүү түрдө жогорулатуу жана денатурация убактысын узартуу.

    ■ Калыптын деградациясы ——Калыпты кайра даярдаңыз.

    A-2 праймер

    ■ Праймерлердин сапаты начар --— Праймерди кайра синтездөө.

    ■ Праймердин бузулушу - Консервациялоо үчүн жогорку концентрациядагы праймерлерди кичине көлөмгө бөлүңүз. Бир нече жолу тоңдуруудан жана эритүүдөн же узак мөөнөттүү 4 ° C криоконсервациядан алыс болуңуз.

    ■ Праймердин туура эмес дизайны (мис. Праймердин узундугу жетишсиз, праймердин ортосунда димер пайда болгон ж.б.)

    A-3 Mg2+концентрация

    ■ Mg2+ концентрациясы өтө төмөн - Мнгди туура көбөйтүү2+ концентрация: Mg оптималдаштыруу2+ оптималдуу Mg аныктоо үчүн 0,5 мм аралыгы менен 1 мМден 3 ммге чейинки реакциялар сериясы аркылуу концентрациялоо2+ ар бир шаблон жана праймер үчүн концентрация.

    A-4 Күйүү температурасы

    ■ Тартуунун жогорку температурасы праймер менен шаблондун байланыштырылышына таасир этет. —— Күйүүчү температураны төмөндөтүңүз жана 2 ° C градиенти менен абалды оптималдаштырыңыз.

    A-5 Узартуу убактысы

    ■ Кыска узартуу убактысы —— Узартуу убактысын жогорулатуу.

    С: Жалган позитив

    Феноменалар: Терс үлгүлөр ошондой эле максаттуу ырааттуулук тилкелерин көрсөтөт.

    А-1 ПТРдин булганышы

    ■ Максаттуу ырааттуулуктун же күчөтүүчү продуктулардын кайчылаш булганышы - Терс үлгүдөгү максаттуу ырааттуулукту камтыган үлгүнү пипеткага түшүрбөө же центрифуга түтүгүнөн төгүп албоо. Реактивдер же жабдуулар болгон нуклеин кислоталарын жок кылуу үчүн автоклавда болушу керек жана булгануунун бар -жогун терс контролдук эксперименттер аркылуу аныктоо керек.

    ■ Реагенттердин булганышы - Реагенттерди бөлүп, төмөнкү температурада сактаңыз.

    A-2 Primer

    ■ Mg2+ концентрациясы өтө төмөн - Мнгди туура көбөйтүү2+ концентрация: Mg оптималдаштыруу2+ оптималдуу Mg аныктоо үчүн 0,5 мм аралыгы менен 1 мМден 3 ммге чейинки реакциялар сериясы аркылуу концентрациялоо2+ ар бир шаблон жана праймер үчүн концентрация.

    ■ Туура эмес праймер дизайны жана максаттуу ырааттуулук максаттуу эмес ырааттуулук менен гомологияга ээ. ——Кайта конструкциялоочу праймерлер.

    С: спецификалык эмес күчөтүү

    Феноменалар: ПТРдин күчөтүү тилкелери күтүлгөн өлчөмгө карама-каршы келет, же чоң, же кичине, же кээде спецификалык күчөтүү тилкелери да, спецификалык эмес күчөтүү тилкелери да пайда болот.

    A-1 Primer

    ■ Праймердин өзгөчөлүгү начар

    ——Кайта конструкциялоочу праймер.

    ■ Праймердин концентрациясы өтө жогору —— денатурациянын температурасын туура жогорулатуу жана денатурация убактысын узартуу.

    A-2 Mg2+ концентрация

    ■ Mg2+ концентрация өтө жогору —— Mg2+ концентрациясын туура азайтуу: Mg оптималдаштыруу2+ оптималдуу Mg аныктоо үчүн 0,5 мм аралыгы менен 1 мМден 3 ммге чейинки реакциялар сериясы аркылуу концентрациялоо2+ ар бир шаблон жана праймер үчүн концентрация.

    А-3 Термостабилдүү полимераза

    ■ Ферменттин ашыкча өлчөмү ——Ферменттин көлөмүн туура 0,5 У аралыкта азайтуу.

    A-4 Күйүү температурасы

    ■ Күйгүзүү температурасы өтө төмөн —- Тиешелүү түрдө күйгүзүү температурасын жогорулатыңыз же эки баскычтуу күйүү ыкмасын колдонуңуз

    А-5 ПТР циклдери

    ■ ПТР циклдеринин өтө көп болушу - ПТР циклдеринин санын азайтуу.

    С: Жабык же шыбак

    A-1 Primer—— начар специфика —— праймерди кайра долбоорлоо, анын өзгөчөлүгүн жогорулатуу үчүн праймердин ордун жана узундугун өзгөртүү; же Киргизилген ПТРди жасаңыз.

    A-2 үлгүсү ДНК

    —–Калып таза эмес - шаблонду тазалаңыз же ДНКны тазалоочу комплекттер менен бөлүп алыңыз.

    A-3 Mg2+ концентрация

    ——Мг2+ концентрация өтө жогору —— Мгди туура азайтуу2+ концентрация: Mg оптималдаштыруу2+ оптималдуу Mg аныктоо үчүн 0,5 мм аралыгы менен 1 мМден 3 ммге чейинки реакциялар сериясы аркылуу концентрациялоо2+ ар бир шаблон жана праймер үчүн концентрация.

    A-4 dNTP

    ——ДНТПлардын концентрациясы өтө жогору —ДНТПнын концентрациясын тийиштүү түрдө азайтыңыз

    A-5 Күйүү температурасы

    ——Күйүү температурасы өтө төмөн ——Жуууу температурасын тийиштүү түрдө жогорулатыңыз

    A-6 циклдери

    ——Ото көп цикл ——Циклдин санын оптималдаштыруу

    С: 50 мкл ПТР реакция системасына канча шаблон ДНК кошулушу керек?
    ytry
    С: Узун фрагменттерди кантип көбөйтүү керек?

    Биринчи кадам - ​​ылайыктуу полимеразаны тандоо. Кадимки Taq полимеразасы 3'-5 'экзонуклеаз активдүүлүгүнүн жоктугунан текшере албайт, жана дал келбөөчүлүк фрагменттердин кеңейтүү эффективдүүлүгүн төмөндөтөт. Ошондуктан, кадимки Taq полимеразасы 5 кбдан чоңураак максаттуу фрагменттерди эффективдүү түрдө күчөтө албайт. Атайын модификациясы же башка жогорку ишенимдүүлүк полимеразасы бар так полимеразасы узартуунун эффективдүүлүгүн жогорулатуу жана узун фрагменттин күчөтүлүшүнүн муктаждыктарын канааттандыруу үчүн тандалышы керек. Мындан тышкары, узун фрагменттерди күчөтүү праймер дизайнын, денатурация убактысын, узартуу убактысын, буфердик рН ж. Калыптын бузулушуна жол бербөө үчүн, 94 ° С денатурация убактысы циклде 30 сек же андан азга чейин кыскартылышы керек, ал эми күчөтүүдөн мурун температураны 94 ° Сге чейин көтөрүү убактысы 1 мүнөттөн аз болушу керек. Мындан тышкары, узартуу температурасын болжол менен 68 ° Сге орнотуу жана узартуу убактысын 1 кб/мин ылдамдыгына ылайык долбоорлоо узун фрагменттердин эффективдүү күчөтүлүшүн камсыздай алат.

    С: ПТРдин күчөтүү ишенимдүүлүгүн кантип жакшыртуу керек?

    ПТРди күчөтүүнүн каталык ылдамдыгы ар кандай ДНК полимеразаларын жогорку ишенимдүүлүк менен азайтууга болот. Буга чейин табылган бардык Taq ДНК полимеразаларынын ичинен Pfu ферментинин эң төмөнкү ката ылдамдыгы жана эң жогорку ишенимдүүлүгү бар (тиркелген таблицаны караңыз). Фермент тандоодон тышкары, изилдөөчүлөр реакция шарттарын оптималдаштыруу аркылуу ПТР мутация ылдамдыгын андан ары төмөндөтө алышат, анын ичинде буфердик курамды оптималдаштыруу, термостабилдүү полимеразанын концентрациясы жана ПТР циклинин санын оптималдаштыруу.

    Кабарыңызды бул жерге жазыңыз жана бизге жөнөтүңүз