Магниттик жаныбар ткандарынын геномдук ДНК топтому

A-1 Баштапкы үлгүдөгү клеткалардын же вирустун аз концентрациясы-Клеткалардын же вирустардын концентрациясын байытуу.

A-2 Үлгүлөрдүн жетишсиз лизиси-Үлгүлөр лизис буферине жакшылап аралаштырылган эмес. Импульсту 1-2 жолу кылдат аралаштыруу сунушталат. - протеиназа К активдүүлүгүнүн төмөндөшүнөн келип чыккан жетишсиз клетка лизиси. - жетишсиз жылуу ванна убактысынан улам клетканын лизиси же белоктун деградациясы. Кыртышты майда бөлүктөргө бөлүп, лизаттагы бардык калдыктарды кетирүү үчүн ванна убактысын узартуу сунушталат.

A-3 ДНКнын адсорбциясы жетишсиз. -Эч кандай этанол же 100% этанолдун ордуна төмөн пайыз лизатты айлантуу колоннасына өткөрүп берүүдөн мурун кошулган эмес.

A-4 Элюция буферинин pH мааниси өтө төмөн. —РНны 8.0-8.3 ортосунда тууралаңыз.

Элюенттеги этанолдун калдыгы.

—Элюментте PW калдык жуу буфери бар. Этанолду айлантуучу мамычаны 3-5 мүнөткө центрифугалоо, андан кийин бөлмө температурасында же 50 ℃ инкубаторго 1-2 мүнөт коюу менен алып салууга болот.

A-1 Үлгү жаңы эмес. - үлгүдөгү ДНКнын деградациялангандыгын аныктоо үчүн контроль катары оң үлгүдөгү ДНКны бөлүп алыңыз.

А-2 Туура эмес алдын ала дарылоо. - ашыкча суюк азот майдалоо, нымдуулукту калыбына келтирүү же үлгүнүн өтө чоң өлчөмү менен шартталган.

Алдын ала дарылоо ар кандай үлгүлөр үчүн ар кандай болушу керек. Өсүмдүктөрдүн үлгүлөрү үчүн суюк азотту жакшылап майдалоо керек. Жаныбарлардын үлгүлөрү үчүн суюк азотто гомогенат же кылдат майдалаңыз. G+ бактериялары жана ачыткы сыяктуу сындырылышы кыйын болгон клетка дубалдары бар үлгүлөр үчүн клетка дубалдарын сындыруу үчүн лизоцим, литиказа же механикалык ыкмаларды колдонуу сунушталат.

4992201/4992202 Өсүмдүктөрдүн геномдук ДНК комплекси экстракция үчүн хлороформду талап кылган мамычага негизделген ыкманы кабыл алат. Бул ар кандай өсүмдүктөрдүн үлгүлөрүнө, ошондой эле өсүмдүктөрдүн кургак порошогуна ылайыктуу. Hi-DNAsecure Plant Kit дагы мамычага негизделген, бирок фенол/хлороформ чыгаруунун кажети жок болгондуктан, аны коопсуз жана уулуу кылбайт. Бул полисахариддери көп жана полифенолго бай өсүмдүктөр үчүн ылайыктуу. 4992709/4992710 DNAquick өсүмдүктөр системасы суюктукка негизделген ыкманы кабыл алат. Фенол/хлороформ экстракциясы да керек эмес. Тазалоо процедурасы жөнөкөй жана ылдам, үлгүнүн башталышына эч кандай чек жок, андыктан колдонуучулар эксперименталдык талаптарга ылайык сумманы ийкемдүү түрдө тууралай алышат. GDNA фрагменттеринин чоң көлөмүн жогорку түшүмдүүлүк менен алууга болот.

Геномдук ДНК TIANamp Blood DNA DNA комплектинин жардамы менен адамдын толук кан үлгүлөрүнүн ар кандай көлөмүнөн алынган. Жыйынтыктар төмөнкүдөй. Натыйжалар шилтеме катары гана келтирилген, экстракциянын иш жүзүндөгү жыйынтыктары үлгүлөрдүн шарттарына жараша болот.

Кан уюган ДНКны алуу бул эки комплектке киргизилген реагенттерди колдонуу менен, протоколду кандын уюган ДНКны алуу боюнча атайын көрсөтмөгө өзгөртүү аркылуу ишке ашырылышы мүмкүн. Кан уюган ДНКны алуу протоколунун жумшак көчүрмөсү суроо -талап боюнча берилиши мүмкүн.

1 мл PBS, кадимки туздуу же TE буфер менен жаңы үлгү токтото туруу. Үлгүнү гомогенизатор менен толугу менен гомогендештирип, чөгүндү центрифугалоо аркылуу түтүктүн түбүнө чогултуп алыңыз. Супернатантты жок кылыңыз жана 200 мкл буфердик GA менен чөкмөнү кайра чайкаңыз. Төмөнкү ДНК тазалоо көрсөтмөгө ылайык жүргүзүлүшү мүмкүн.

Плазмада, сывороткада жана дене суюктугунда gDNAны тазалоо үчүн TIANamp Micro DNA Set сунушталат. Сарык/плазма үлгүлөрүнөн gDNA вирусун тазалоо үчүн TIANamp Virus DNA/RNA Kit сунушталат. Плазма жана плазма үлгүлөрүнөн бактериялык gDNA тазалоо үчүн TIANamp Bacteria DNA Kit сунушталат (оң бактериялар үчүн лизоцим кошулушу керек). Шилекей үлгүлөрү үчүн Hi-Swab DNA Kit жана TIANamp Bacteria DNA Kit сунушталат.

DNAsecure өсүмдүк топтому же DNAquick өсүмдүк системасы козу карын геномун алуу үчүн сунушталат. Ачыткы геномун алуу үчүн TIANamp ачыткы ДНКсы сунушталат (литиказа өзүн өзү даярдашы керек).