Чычкан ткандары Түз ПТР комплект

Түздөн -түз жаныбарлардын ткандарынын үлгүлөрүнөн максаттуу генди тез арада күчөтүү.

Чычкан Tissue Direct PCR Kit тез геномдук ДНК даярдоо жана ПТР күчөтүү үчүн бардык реагенттерди камтыган уникалдуу таңгак дизайнын кабыл алат. Бул чычкандын ткандарынан (куйрук, кулак жана бармак) бир кадамдык геномдуу ДНК тазалоо жана андан кийинки ПТРди күчөтүү жана аныктоо үчүн колдонулат. Бүт процесс гомогендештирүүнү, талкалоону, бир түндө сиңирүүнү, органикалык эриткичтерди бөлүп алууну, этанол жаан -чачынын же мамычаны тазалоо кадамдарын камтыбайт. Туруктуу натыйжаларды жөнөкөй жана тез операциялар менен алууга болот.

Бул комплект менен берилген 2 × Dir ПТР MasterMix - бул протеин сыяктуу кирлерди жок кылбастан ДНКны эффективдүү жана өзгөчө күчөтө турган абдан шайкеш ПТР реагенти. Бул реагентте антитело өзгөртүлгөн ысык башталыш барTaq ДНК полимераза, dNTPs, MgCl2, буферлер, ошондой эле ПКР реакциясы үчүн күчөткүч, оптимизатор жана стабилизатор. ПТР реакциясын болжол менен алынган шаблонду жана атайын праймерлерди кошуу аркылуу жасаса болот. Бүт процесс тез, жөнөкөй, сезимтал, конкреттүү жана туруктуу, бул өзгөчө өткөрүмдүүлүгү жогору скрининг үчүн ылайыктуу. 2 × Dir PCR MasterMix премикс электрофорез боёгучун камтыйт, андыктан ПЦР продукциялары реакциядан кийин электрофорезди аныктоо үчүн түз жөнөтүлүшү мүмкүн. ПТР продуктусунун 3 'учунда А калдыктары бар, аны ТА клондоштуруу үчүн колдонсо болот.

Cat. Жок Packing Size
4992531 20 µl × 50 rxn
4992532 20 µl × 200 rxn

Продукциянын чоо -жайы

Жумуш процесси

Эксперименталдык мисал

FAQ

Продукт тэгдери

Өзгөчөлүктөрү

■ Жөнөкөй жана тез: Геномдук ДНКны чычкандын ткандарынан 60 мүнөттө суюк азот майдалоосуз жана органикалык эриткичтерди бөлүп алуусуз тез эле алууга болот.
■ Кеңири колдонуу: Бул чычкандын куйругунан, кулагынан, бармагынан жана башка ткандардан геномдук ДНКны бир баскычтуу алуу үчүн ылайыктуу.
■ Жогорку спецификалуулук: Бул продуктта колдонулган Taq полимеразасы-бул антитело өзгөртүлгөн ысык башталыш ферменти, өзгөчө шаблон жана праймер аффинитети жана күчөтүү спецификасы бар, бул өзгөчө генотип жана трансгендик идентификация үчүн ылайыктуу.
■ Генди аныктоо: Продукт ишенимдүү жыйынтыктар менен иштөө үчүн оңой жана ал өзгөчө чычкандардын ткандарын жогорку ылдамдыкта талдоо жана аныктоо үчүн ылайыктуу

Бардык буюмдар ODM/OEM үчүн жекече болот. Чоо -жайын билүү үчүн,сураныч, Customized Service (ODM/OEM) чыкылдатыңыз


  • Мурунку:
  • Кийинки:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×

    Workflow

    Experimental Example

    Чычкан Tissue Direct PCR Kit жана А провайдеринин тиешелүү продуктусун колдонуу менен чычкандын куйругунан, чычкандын кулагынан жана келемиш куйругунан 1000 bp, 2000 bp жана 3000 bp фрагменттерин күчөтүү. Натыйжа Mouse Tissue Direct ПТР комплектинин спецификасына жана ийгиликке ээ экендигин көрсөттү.

    С: Күчөтүүчү топтор жок

    A-1 шаблону

    ■ Калыпта протеин кошулмалары же Taq ингибиторлору бар, ж.

    ■ Калыптын денатурациясы толук эмес - Денатурация температурасын тийиштүү түрдө жогорулатуу жана денатурация убактысын узартуу.

    ■ Калыптын деградациясы ——Калыпты кайра даярдаңыз.

    A-2 праймер

    ■ Праймерлердин сапаты начар --— Праймерди кайра синтездөө.

    ■ Праймердин бузулушу - Консервациялоо үчүн жогорку концентрациядагы праймерлерди кичине көлөмгө бөлүңүз. Бир нече жолу тоңдуруудан жана эритүүдөн же узак мөөнөттүү 4 ° C криоконсервациядан алыс болуңуз.

    ■ Праймердин туура эмес дизайны (мис. Праймердин узундугу жетишсиз, праймердин ортосунда димер пайда болгон ж.б.)

    A-3 Mg2+концентрация

    ■ Mg2+ концентрациясы өтө төмөн - Мнгди туура көбөйтүү2+ концентрация: Mg оптималдаштыруу2+ оптималдуу Mg аныктоо үчүн 0,5 мм аралыгы менен 1 мМден 3 ммге чейинки реакциялар сериясы аркылуу концентрациялоо2+ ар бир шаблон жана праймер үчүн концентрация.

    A-4 Күйүү температурасы

    ■ Тартуунун жогорку температурасы праймер менен шаблондун байланыштырылышына таасир этет. —— Күйүүчү температураны төмөндөтүңүз жана 2 ° C градиенти менен абалды оптималдаштырыңыз.

    A-5 Узартуу убактысы

    ■ Кыска узартуу убактысы —— Узартуу убактысын жогорулатуу.

    С: Жалган позитив

    Феноменалар: Терс үлгүлөр ошондой эле максаттуу ырааттуулук тилкелерин көрсөтөт.

    А-1 ПТРдин булганышы

    ■ Максаттуу ырааттуулуктун же күчөтүүчү продуктулардын кайчылаш булганышы - Терс үлгүдөгү максаттуу ырааттуулукту камтыган үлгүнү пипеткага түшүрбөө же центрифуга түтүгүнөн төгүп албоо. Реактивдер же жабдуулар болгон нуклеин кислоталарын жок кылуу үчүн автоклавда болушу керек жана булгануунун бар -жогун терс контролдук эксперименттер аркылуу аныктоо керек.

    ■ Реагенттердин булганышы - Реагенттерди бөлүп, төмөнкү температурада сактаңыз.

    A-2 Primer

    ■ Mg2+ концентрациясы өтө төмөн - Мнгди туура көбөйтүү2+ концентрация: Mg оптималдаштыруу2+ оптималдуу Mg аныктоо үчүн 0,5 мм аралыгы менен 1 мМден 3 ммге чейинки реакциялар сериясы аркылуу концентрациялоо2+ ар бир шаблон жана праймер үчүн концентрация.

    ■ Туура эмес праймер дизайны жана максаттуу ырааттуулук максаттуу эмес ырааттуулук менен гомологияга ээ. ——Кайта конструкциялоочу праймерлер.

    С: спецификалык эмес күчөтүү

    Феноменалар: ПТРдин күчөтүү тилкелери күтүлгөн өлчөмгө карама-каршы келет, же чоң, же кичине, же кээде спецификалык күчөтүү тилкелери да, спецификалык эмес күчөтүү тилкелери да пайда болот.

    A-1 Primer

    ■ Праймердин өзгөчөлүгү начар

    ——Кайта конструкциялоочу праймер.

    ■ Праймердин концентрациясы өтө жогору —— денатурациянын температурасын туура жогорулатуу жана денатурация убактысын узартуу.

    A-2 Mg2+ концентрация

    ■ Mg2+ концентрация өтө жогору —— Mg2+ концентрациясын туура азайтуу: Mg оптималдаштыруу2+ оптималдуу Mg аныктоо үчүн 0,5 мм аралыгы менен 1 мМден 3 ммге чейинки реакциялар сериясы аркылуу концентрациялоо2+ ар бир шаблон жана праймер үчүн концентрация.

    А-3 Термостабилдүү полимераза

    ■ Ферменттин ашыкча өлчөмү ——Ферменттин көлөмүн туура 0,5 У аралыкта азайтуу.

    A-4 Күйүү температурасы

    ■ Күйгүзүү температурасы өтө төмөн —- Тиешелүү түрдө күйгүзүү температурасын жогорулатыңыз же эки баскычтуу күйүү ыкмасын колдонуңуз

    А-5 ПТР циклдери

    ■ ПТР циклдеринин өтө көп болушу - ПТР циклдеринин санын азайтуу.

    С: Жабык же шыбак

    A-1 Primer—— начар специфика —— праймерди кайра долбоорлоо, анын өзгөчөлүгүн жогорулатуу үчүн праймердин ордун жана узундугун өзгөртүү; же Киргизилген ПТРди жасаңыз.

    A-2 үлгүсү ДНК

    —–Калып таза эмес - шаблонду тазалаңыз же ДНКны тазалоочу комплекттер менен бөлүп алыңыз.

    A-3 Mg2+ концентрация

    ——Мг2+ концентрация өтө жогору —— Мгди туура азайтуу2+ концентрация: Mg оптималдаштыруу2+ оптималдуу Mg аныктоо үчүн 0,5 мм аралыгы менен 1 мМден 3 ммге чейинки реакциялар сериясы аркылуу концентрациялоо2+ ар бир шаблон жана праймер үчүн концентрация.

    A-4 dNTP

    ——ДНТПлардын концентрациясы өтө жогору —ДНТПнын концентрациясын тийиштүү түрдө азайтыңыз

    A-5 Күйүү температурасы

    ——Күйүү температурасы өтө төмөн ——Жуууу температурасын тийиштүү түрдө жогорулатыңыз

    A-6 циклдери

    ——Ото көп цикл ——Циклдин санын оптималдаштыруу

    С: 50 мкл ПТР реакция системасына канча шаблон ДНК кошулушу керек?
    ytry
    С: Узун фрагменттерди кантип көбөйтүү керек?

    Биринчи кадам - ​​ылайыктуу полимеразаны тандоо. Кадимки Taq полимеразасы 3'-5 'экзонуклеаз активдүүлүгүнүн жоктугунан текшере албайт, жана дал келбөөчүлүк фрагменттердин кеңейтүү эффективдүүлүгүн төмөндөтөт. Ошондуктан, кадимки Taq полимеразасы 5 кбдан чоңураак максаттуу фрагменттерди эффективдүү түрдө күчөтө албайт. Атайын модификациясы же башка жогорку ишенимдүүлүк полимеразасы бар так полимеразасы узартуунун эффективдүүлүгүн жогорулатуу жана узун фрагменттин күчөтүлүшүнүн муктаждыктарын канааттандыруу үчүн тандалышы керек. Мындан тышкары, узун фрагменттерди күчөтүү праймер дизайнын, денатурация убактысын, узартуу убактысын, буфердик рН ж. Калыптын бузулушуна жол бербөө үчүн, 94 ° С денатурация убактысы циклде 30 сек же андан азга чейин кыскартылышы керек, ал эми күчөтүүдөн мурун температураны 94 ° Сге чейин көтөрүү убактысы 1 мүнөттөн аз болушу керек. Мындан тышкары, узартуу температурасын болжол менен 68 ° Сге орнотуу жана узартуу убактысын 1 кб/мин ылдамдыгына ылайык долбоорлоо узун фрагменттердин эффективдүү күчөтүлүшүн камсыздай алат.

    С: ПТРдин күчөтүү ишенимдүүлүгүн кантип жакшыртуу керек?

    ПТРди күчөтүүнүн каталык ылдамдыгы ар кандай ДНК полимеразаларын жогорку ишенимдүүлүк менен азайтууга болот. Буга чейин табылган бардык Taq ДНК полимеразаларынын ичинен Pfu ферментинин эң төмөнкү ката ылдамдыгы жана эң жогорку ишенимдүүлүгү бар (тиркелген таблицаны караңыз). Фермент тандоодон тышкары, изилдөөчүлөр реакция шарттарын оптималдаштыруу аркылуу ПТР мутация ылдамдыгын андан ары төмөндөтө алышат, анын ичинде буфердик курамды оптималдаштыруу, термостабилдүү полимеразанын концентрациясы жана ПТР циклинин санын оптималдаштыруу.

    Кабарыңызды бул жерге жазыңыз жана бизге жөнөтүңүз