2 × Taq Platinum PCR Mix
Аракетти аныктоо
1 бирдик (U) Taq Platinum ДНК Полимеразанын активдүүлүгү шаблон/праймер катары активдештирилген лосось спермасынын ДНКсын колдонуу менен 30 мүнөт ичинде 74 ° C температурада 10 nmol дезоксинуклеотиддерди кислотада ээрибес заттарга кошуу үчүн керектүү болгон фермент катары аныкталат.
Сапатты көзөмөлдөө
SDS-PAGE аныктоо аркылуу тазалык 99%дан ашык; Экзогендүү нуклеазанын активдүүлүгү аныкталбайт; Адам геномундагы бир нускадагы ген эффективдүү түрдө күчөтүлүшү мүмкүн; Бир жума бою бөлмө температурасында сакталганда эч кандай активдүүлүк өзгөрбөйт.
Негизги техникалык параметрлер
Ал 5'-3 ′ экзонуклеазалык активдүүлүккө жана 3′-5 ′ экзонуклеаздык активдүүлүккө ээ жана анын ишенимдүүлүгү Pfu полимеразанын жанында. Taq Platinum Polymerase кеңейтүү ылдамдыгы Pfu полимеразага караганда тезирээк жана күчөтүү натыйжалуулугу жогору. ПТР продуктулары түз учу менен байланыштырылышы же TA вектору менен клондоштурулушу мүмкүн. Эгерде клондоштуруунун эффективдүүлүгүн жогорулатуу керек болсо, анда аны тазалап, TA векторуна клондоодон мурун 3'-dA ашууларын кошуу сунушталат.
Бир түтүк Taq Platinum MasterMix (National High-Tech Product Certification)
■ Taq Platinum MasterMix ПТР реакциясынын спецификасын жана сезгичтигин жакшыртты жана GC мазмуну жогору, экинчи структурасы жана ушул сыяктуу татаал шаблондорду күчөтө алат. Максаттуу шаблондун 2 көчүрмөсүн күчөтсө болот, бул дагы так эксперименталдык жыйынтыктарды камсыз кылат.
■ Уникалдуу Taq Platinum MasterMix формуласы бүтүндөй реакция системасын абдан стабилдүү кылат жана активдүүлүк кайра-кайра тоңдуруу же 4 ° Сде узак мөөнөттүү сактоо менен таасир этпейт.
■ Туруктуу жана эффективдүү алдын ала даярдалган ПТР аралашмасы операцияны тез жана жөнөкөй кылып, эмгек сыйымдуулугун жана үлгүлөрдү алуу катасын абдан азайта алат. ПТРдин шарттарына карата талаптарды төмөндөтүүчү, жогорку өндүрүмдүү ПТР күчөткүчү жана оптимизатору да аралашмага киргизилген.
■ Бул продуктта боёкчу жана боёксуз системалар бар. Боёкту камтыган MasterMix продуктуларын жүктөө буферин кошпостон, ПТРден кийин түздөн-түз электрофорациялоого болот.
Колдонмолор
Бул геном сыяктуу татаал шаблондордон жогорку ишенимдүү продуктуларды күчөтүү үчүн Pfu полимеразаны алмаштыра алат жана экспрессия гендерин клондоштуруу, сайтка мүнөздүү мутациялар жана бир нуклеотид полиморфизминин анализи (SNP) ж.
ПТР праймерлерин иштеп чыгууда сактык чаралары:
Праймердин узундугу адатта 20-25 мер. Бирок, узун фрагменттик ПТРди аткарууда праймердин узундугун 30-35 мерге чейин көбөйтүү керек.
■ Эки праймердин ортосунда эч кандай кошумча жупташуу жок, айрыкча 3 ′ аягындагы акыркы 3 база үчүн.
■ GC мазмуну 50-60%болушу керек жана жергиликтүү бай GC же ATден алыс болуңуз. Праймер менен шаблонду стабилдүү түрдө байлап алуу үчүн, 3 байтындагы AT структурасынан алыс болуңуз.
■ Экинчи структураны түзүү үчүн праймерден алыс болуңуз.
■ Тм температурасы бири -бирине жакын эки праймерди тандаңыз.
ПТР үчүн праймерлердин Tm наркын эсептөө:
■ Праймер 20 мерден төмөн болгондо: Tm = 2 ° C × (A+T)+4 ° C × (G+C).
■ Праймер 20 мерден жогору болгондо: Tm = 81,5+0,41 × (GC%)-600/L, мында L-праймердин узундугу.
■ Күйгүзүү температурасын (Тм-5) ° С коюңуз.
PCR Primer Input
Праймерлердин тиешелүү акыркы концентрациясы 0.1 мкм менен 1.0 мкм ортосунда тандалышы мүмкүн. Праймер концентрациясынын өтө төмөндүгү күчөтүүчү продукциянын түшүмдүүлүгүнүн төмөндүгүнө алып келет, ал эми праймердин концентрациясы өтө спецификалык эмес күчөтүүгө көбүрөөк дуушар болот. Адатта, шаблон ДНКнын өлчөмү чоң же татаал шаблон ДНК болгондо (мисалы, адамдын геному ДНКсы) шаблон катары колдонулганда, праймердин концентрациясы төмөн болушу керек. Калып ДНКнын өлчөмү кичине болгондо же жөнөкөй шаблон ДНК (мисалы, плазмиддик ДНК ж. Б.) Шаблон катары колдонулганда, праймердин концентрациясы жогору болушу керек.
Бардык буюмдар ODM/OEM үчүн жекече болот. Чоо -жайын билүү үчүн,сураныч, Customized Service (ODM/OEM) чыкылдатыңыз
  |
1 кб фрагментти күчөтүү үчүн шаблон катары геномдук ДНКны колдонуңуз. ПТР реакциясынан кийин электрофорезди аныктоо үчүн 5 мкл алыңыз. |
A-1 шаблону
■ Калыпта протеин кошулмалары же Taq ингибиторлору бар, ж.
■ Калыптын денатурациясы толук эмес - Денатурация температурасын тийиштүү түрдө жогорулатуу жана денатурация убактысын узартуу.
■ Калыптын деградациясы ——Калыпты кайра даярдаңыз.
A-2 праймер
■ Праймерлердин сапаты начар --— Праймерди кайра синтездөө.
■ Праймердин бузулушу - Консервациялоо үчүн жогорку концентрациядагы праймерлерди кичине көлөмгө бөлүңүз. Бир нече жолу тоңдуруудан жана эритүүдөн же узак мөөнөттүү 4 ° C криоконсервациядан алыс болуңуз.
■ Праймердин туура эмес дизайны (мис. Праймердин узундугу жетишсиз, праймердин ортосунда димер пайда болгон ж.б.)
A-3 Mg2+концентрация
■ Mg2+ концентрациясы өтө төмөн - Мнгди туура көбөйтүү2+ концентрация: Mg оптималдаштыруу2+ оптималдуу Mg аныктоо үчүн 0,5 мм аралыгы менен 1 мМден 3 ммге чейинки реакциялар сериясы аркылуу концентрациялоо2+ ар бир шаблон жана праймер үчүн концентрация.
A-4 Күйүү температурасы
■ Тартуунун жогорку температурасы праймер менен шаблондун байланыштырылышына таасир этет. —— Күйүүчү температураны төмөндөтүңүз жана 2 ° C градиенти менен абалды оптималдаштырыңыз.
A-5 Узартуу убактысы
■ Кыска узартуу убактысы —— Узартуу убактысын жогорулатуу.
Феноменалар: Терс үлгүлөр ошондой эле максаттуу ырааттуулук тилкелерин көрсөтөт.
А-1 ПТРдин булганышы
■ Максаттуу ырааттуулуктун же күчөтүүчү продуктулардын кайчылаш булганышы - Терс үлгүдөгү максаттуу ырааттуулукту камтыган үлгүнү пипеткага түшүрбөө же центрифуга түтүгүнөн төгүп албоо. Реактивдер же жабдуулар болгон нуклеин кислоталарын жок кылуу үчүн автоклавда болушу керек жана булгануунун бар -жогун терс контролдук эксперименттер аркылуу аныктоо керек.
■ Реагенттердин булганышы - Реагенттерди бөлүп, төмөнкү температурада сактаңыз.
A-2 Primer
■ Mg2+ концентрациясы өтө төмөн - Мнгди туура көбөйтүү2+ концентрация: Mg оптималдаштыруу2+ оптималдуу Mg аныктоо үчүн 0,5 мм аралыгы менен 1 мМден 3 ммге чейинки реакциялар сериясы аркылуу концентрациялоо2+ ар бир шаблон жана праймер үчүн концентрация.
■ Туура эмес праймер дизайны жана максаттуу ырааттуулук максаттуу эмес ырааттуулук менен гомологияга ээ. ——Кайта конструкциялоочу праймерлер.
Феноменалар: ПТРдин күчөтүү тилкелери күтүлгөн өлчөмгө карама-каршы келет, же чоң, же кичине, же кээде спецификалык күчөтүү тилкелери да, спецификалык эмес күчөтүү тилкелери да пайда болот.
A-1 Primer
■ Праймердин өзгөчөлүгү начар
——Кайта конструкциялоочу праймер.
■ Праймердин концентрациясы өтө жогору —— денатурациянын температурасын туура жогорулатуу жана денатурация убактысын узартуу.
A-2 Mg2+ концентрация
■ Mg2+ концентрация өтө жогору —— Mg2+ концентрациясын туура азайтуу: Mg оптималдаштыруу2+ оптималдуу Mg аныктоо үчүн 0,5 мм аралыгы менен 1 мМден 3 ммге чейинки реакциялар сериясы аркылуу концентрациялоо2+ ар бир шаблон жана праймер үчүн концентрация.
А-3 Термостабилдүү полимераза
■ Ферменттин ашыкча өлчөмү ——Ферменттин көлөмүн туура 0,5 У аралыкта азайтуу.
A-4 Күйүү температурасы
■ Күйгүзүү температурасы өтө төмөн —- Тиешелүү түрдө күйгүзүү температурасын жогорулатыңыз же эки баскычтуу күйүү ыкмасын колдонуңуз
А-5 ПТР циклдери
■ ПТР циклдеринин өтө көп болушу - ПТР циклдеринин санын азайтуу.
A-1 Primer—— начар специфика —— праймерди кайра долбоорлоо, анын өзгөчөлүгүн жогорулатуу үчүн праймердин ордун жана узундугун өзгөртүү; же Киргизилген ПТРди жасаңыз.
A-2 үлгүсү ДНК
—–Калып таза эмес - шаблонду тазалаңыз же ДНКны тазалоочу комплекттер менен бөлүп алыңыз.
A-3 Mg2+ концентрация
——Мг2+ концентрация өтө жогору —— Мгди туура азайтуу2+ концентрация: Mg оптималдаштыруу2+ оптималдуу Mg аныктоо үчүн 0,5 мм аралыгы менен 1 мМден 3 ммге чейинки реакциялар сериясы аркылуу концентрациялоо2+ ар бир шаблон жана праймер үчүн концентрация.
A-4 dNTP
——ДНТПлардын концентрациясы өтө жогору —ДНТПнын концентрациясын тийиштүү түрдө азайтыңыз
A-5 Күйүү температурасы
——Күйүү температурасы өтө төмөн ——Жуууу температурасын тийиштүү түрдө жогорулатыңыз
A-6 циклдери
——Ото көп цикл ——Циклдин санын оптималдаштыруу
Биринчи кадам - ылайыктуу полимеразаны тандоо. Кадимки Taq полимеразасы 3'-5 'экзонуклеаз активдүүлүгүнүн жоктугунан текшере албайт, жана дал келбөөчүлүк фрагменттердин кеңейтүү эффективдүүлүгүн төмөндөтөт. Ошондуктан, кадимки Taq полимеразасы 5 кбдан чоңураак максаттуу фрагменттерди эффективдүү түрдө күчөтө албайт. Атайын модификациясы же башка жогорку ишенимдүүлүк полимеразасы бар так полимеразасы узартуунун эффективдүүлүгүн жогорулатуу жана узун фрагменттин күчөтүлүшүнүн муктаждыктарын канааттандыруу үчүн тандалышы керек. Мындан тышкары, узун фрагменттерди күчөтүү праймер дизайнын, денатурация убактысын, узартуу убактысын, буфердик рН ж. Калыптын бузулушуна жол бербөө үчүн, 94 ° С денатурация убактысы циклде 30 сек же андан азга чейин кыскартылышы керек, ал эми күчөтүүдөн мурун температураны 94 ° Сге чейин көтөрүү убактысы 1 мүнөттөн аз болушу керек. Мындан тышкары, узартуу температурасын болжол менен 68 ° Сге орнотуу жана узартуу убактысын 1 кб/мин ылдамдыгына ылайык долбоорлоо узун фрагменттердин эффективдүү күчөтүлүшүн камсыздай алат.
ПТРди күчөтүүнүн каталык ылдамдыгы ар кандай ДНК полимеразаларын жогорку ишенимдүүлүк менен азайтууга болот. Буга чейин табылган бардык Taq ДНК полимеразаларынын ичинен Pfu ферментинин эң төмөнкү ката ылдамдыгы жана эң жогорку ишенимдүүлүгү бар (тиркелген таблицаны караңыз). Фермент тандоодон тышкары, изилдөөчүлөр реакция шарттарын оптималдаштыруу аркылуу ПТР мутация ылдамдыгын андан ары төмөндөтө алышат, анын ичинде буфердик курамды оптималдаштыруу, термостабилдүү полимеразанын концентрациясы жана ПТР циклинин санын оптималдаштыруу.
Продукт категориялары
ЭМНЕ ҮЧҮН БИЗДИ ТАНДАЙСЫН
Ал түзүлгөндөн бери, биздин фабрика принципти сактоо менен биринчи дүйнөлүк класстагы продуктыларды иштеп чыгууда
биринчи сапат. Биздин өнүмдөр жаңы жана эски кардарлардын арасында индустрияда эң сонун кадыр -баркка ээ болду.
- Тел: +86 010-59822688
- 5 -имарат, No86, Шуангинь Батыш жолу, Чангпин району, Пекин.
- people@tiangen.com
