Blood Direct PCR Kit

Түздөн -түз канды экстракциясыз шаблон катары колдонуп, максаттуу генди тез көбөйтүү.

Бул комплект адам геномундагы бир нускадагы гендерди эффективдүү күчөтүү үчүн генетикалык инженерияланган ингибитор ДНК полимеразасын кабыл алат. Бул комплекттеги жакшы оптималдаштырылган буфердик система полимеразага ПТР ингибиторлорунун ингибирлөөсүнө катуу каршылык көрсөтүүгө жардам берет, демек, канды жана маданияттуу клеткаларды калыптар катары түздөн -түз ДНКны күчөтө алат. Бул продукт иштетүүгө оңой жана ДНК тазалоо же үлгү алдын ала тазалоо сыяктуу татаал кадамдарды талап кылбайт.
Бул комплект 2 × MasterMix түрүндө берилет жана реакцияны жөн гана кан шаблонун жана тиешелүү аныктоочу праймерлерди кошуу менен жасаса болот. Ал адам, чычкан, чочко, бодо жана башка түрлөр сыяктуу сүт эмүүчүлөрдүн культураланган клеткаларына, ошондой эле жаңы же 4 ℃ криоконсервацияланган бүт канга, антикоагулянттарга (EDTA, цитрат, гепарин), суюлтулган уюган канга жана кургак кан тактарына колдонулушу мүмкүн. Whatman 903 жана FTA Elute коммерциялык карталарында сакталат.

Cat. Жок	Packing Size
4992529	20 µl × 100 rxn
4992530	20 µl × 500 rxn

Бизге электрондук кат жөнөтүңүз

Продукциянын чоо -жайы

Эксперименталдык мисал

FAQ

Продукт тэгдери

Өзгөчөлүктөрү

■ Жөнөкөй жана тез: ПТРди күчөтүү үлгүнү даярдоонун жана ДНКны алуунун түйшүктүү кадамдарына муктаж болбостон, канды шаблон катары түздөн -түз аткарса болот.
■ Жогорку тазалык: үлгүлөрдү алдын ала тазалоо жана ДНКны алуу кадамдарын өткөрүп жиберүү үлгүлөрдүн кайчылаш булгануусун болтурбоого жардам берет.
■ Жогорку өткөрүү жөндөмдүүлүгү: Ири масштабдагы үлгүлөр үчүн ПТРди идентификациялоо комплектти 96/384 кудуктуу ПТР плиталары менен бириктирүү аркылуу ишке ашырылышы мүмкүн.
■ Күчтүү универсалдуулук: Бул комплект жогорку GC фрагменттерин же татаал орто структурасы бар фрагменттерди эффективдүү түрдө күчөтө алат жана күчөтүүнүн узундугу 5 кб чейин болушу мүмкүн.
■ Күчтүү стресске каршылык: Бул комплект ар кандай түрлөрдө сакталып, ар кандай түрлөргө жана кан үлгүлөрүнө колдонулушу мүмкүн.

Колдонмолор

Бул комплектинин ПТР продуктуларында 3'-учунда "А" бар, аны ТК векторун клондоо үчүн түз колдонсо болот. Бул комплект геномдук ДНК фрагменттерин күчөтүү, жогорку ылдамдыктагы генетикалык анализ жана генотипти (мисалы, генди аныктоо) талдоо үчүн колдонулушу мүмкүн.

Бардык буюмдар ODM/OEM үчүн жекече болот. Чоо -жайын билүү үчүн,сураныч, Customized Service (ODM/OEM) чыкылдатыңыз

Мурунку: TIANcombi DNA Lyse & Det PCR Kit

Кийинки: Чычкан ткандары Түз ПТР комплект

	Үлгү катары адамдын EDTA антикоагулянтын колдонуу менен, ГКнын ар кандай мазмуну бар 4 ген Blood Direct PCR Kit тарабынан күчөтүлгөн. ПТР реакция системасы 20 мкл болгон жана шаблон катары 1 мкл кан колдонулган. М: TIANGEN Маркер II; 1: Fragment көлөмү 1090 bp, GC мазмуну 68,1%; 2: Fragment көлөмү 1915 bp, GC мазмуну 70,4%; 3: Fragment көлөмү 448 bp, GC мазмуну 74,8%; 4: Fragment көлөмү 1527 bp, GC мазмуну 61,5%. Эксперименталдык жыйынтыктар: Blood Direct PCR Kit ДНК фрагменттерин 61.5%-74.8%диапазонунда GC мазмуну менен эффективдүү түрдө күчөтө алат, бул анын жогорку GC фрагменттерин күчөтүүгө жөндөмдүү экенин билдирет.
	Үлгү катары адамдын EDTA антикоагулянтын колдонуу менен, ар кандай узундуктагы 5 ген (ActB, Prp, DN1.0, Hn2.0 жана Hn4.0) Blood Direct PCR Kit тарабынан күчөтүлгөн. ПТР реакция системасы 20 мкл болгон жана шаблон катары 1 мкл кан колдонулган. М: TIANGEN Маркер II; 1-3: 3 түрдүү кан үлгүлөрү; NTC: праймерсиз башкаруу. Эксперименталдык жыйынтыктар: Blood Direct PCR Kit узундугу 4 кб болгон фрагменттерди күчөтө алат, бул анын узун фрагменттерди күчөтүүгө жөндөмдүү экенин көрсөтөт.
	Үлгү катары адамдын EDTA антикоагулянтын колдонуп, Blood Direct PCR Kit ар кандай кан үлгүлөрүн ПТР аныктоо үчүн колдонулган. ПТР реакция системасы 20 мкл болгон жана шаблон катары 1 мкл кан колдонулган. М: TIANGEN Маркер II; 1-9: кандын жүктөө өлчөмү тиешелүү түрдө 0,1 мкл, 0,2 мкл, 0,3 мкл, 0,4 мкл, 1 мкл, 2 мкл, 3 мкл, 4 мкл жана 5 мкл; NTC: шаблону жок башкаруу Эксперименттик жыйынтыктар: Blood Direct PCR Kit канга күчтүү каршылык көрсөтөт жана 0.1-5 мкл жүктөө диапазону менен кан үлгүлөрүн күчөтө алат.
	Калып катары адамдан, келемиштен, тооктон жана башка түрлөрдөн алынган кан үлгүлөрү колдонулган. Blood Direct PCR Kit PRNP (адам, 750 а.к.), Актин (келемиш, 200 б.п.) жана β-Актинди (Тоок, 1.0 кб) күчөтүү үчүн колдонулган. ПТР реакция системасы 20 мкл болгон жана шаблон катары 1 мкл кан колдонулган. М: TIANGEN Маркер II. Эксперименталдык жыйынтыктар: Blood Direct PCR Kit үлгүлөрдүн кеңири диапазонунда колдонулушу мүмкүн жана ар кандай дарылоо ыкмалары бар ар кандай түрлөрдүн кан үлгүлөрүндө түз ПТРди аныктоо жүргүзүлүшү мүмкүн.

С: Күчөтүүчү топтор жок

A-1 шаблону

■ Калыпта протеин кошулмалары же Taq ингибиторлору бар, ж.

■ Калыптын денатурациясы толук эмес - Денатурация температурасын тийиштүү түрдө жогорулатуу жана денатурация убактысын узартуу.

■ Калыптын деградациясы ——Калыпты кайра даярдаңыз.

A-2 праймер

■ Праймерлердин сапаты начар --— Праймерди кайра синтездөө.

■ Праймердин бузулушу - Консервациялоо үчүн жогорку концентрациядагы праймерлерди кичине көлөмгө бөлүңүз. Бир нече жолу тоңдуруудан жана эритүүдөн же узак мөөнөттүү 4 ° C криоконсервациядан алыс болуңуз.

■ Праймердин туура эмес дизайны (мис. Праймердин узундугу жетишсиз, праймердин ортосунда димер пайда болгон ж.б.)

A-3 Mg²⁺концентрация

■ Mg²⁺ концентрациясы өтө төмөн - Мнгди туура көбөйтүү²⁺концентрация: Mg оптималдаштыруу²⁺ оптималдуу Mg аныктоо үчүн 0,5 мм аралыгы менен 1 мМден 3 ммге чейинки реакциялар сериясы аркылуу концентрациялоо²⁺ ар бир шаблон жана праймер үчүн концентрация.

A-4 Күйүү температурасы

■ Тартуунун жогорку температурасы праймер менен шаблондун байланыштырылышына таасир этет. —— Күйүүчү температураны төмөндөтүңүз жана 2 ° C градиенти менен абалды оптималдаштырыңыз.

A-5 Узартуу убактысы

■ Кыска узартуу убактысы —— Узартуу убактысын жогорулатуу.

С: Жалган позитив

Феноменалар: Терс үлгүлөр ошондой эле максаттуу ырааттуулук тилкелерин көрсөтөт.

А-1 ПТРдин булганышы

■ Максаттуу ырааттуулуктун же күчөтүүчү продуктулардын кайчылаш булганышы - Терс үлгүдөгү максаттуу ырааттуулукту камтыган үлгүнү пипеткага түшүрбөө же центрифуга түтүгүнөн төгүп албоо. Реактивдер же жабдуулар болгон нуклеин кислоталарын жок кылуу үчүн автоклавда болушу керек жана булгануунун бар -жогун терс контролдук эксперименттер аркылуу аныктоо керек.

■ Реагенттердин булганышы - Реагенттерди бөлүп, төмөнкү температурада сактаңыз.

A-2 Primer

■ Mg²⁺ концентрациясы өтө төмөн - Мнгди туура көбөйтүү²⁺ концентрация: Mg оптималдаштыруу²⁺ оптималдуу Mg аныктоо үчүн 0,5 мм аралыгы менен 1 мМден 3 ммге чейинки реакциялар сериясы аркылуу концентрациялоо²⁺ ар бир шаблон жана праймер үчүн концентрация.

■ Туура эмес праймер дизайны жана максаттуу ырааттуулук максаттуу эмес ырааттуулук менен гомологияга ээ. ——Кайта конструкциялоочу праймерлер.

С: спецификалык эмес күчөтүү

Феноменалар: ПТРдин күчөтүү тилкелери күтүлгөн өлчөмгө карама-каршы келет, же чоң, же кичине, же кээде спецификалык күчөтүү тилкелери да, спецификалык эмес күчөтүү тилкелери да пайда болот.

A-1 Primer

■ Праймердин өзгөчөлүгү начар

——Кайта конструкциялоочу праймер.

■ Праймердин концентрациясы өтө жогору —— денатурациянын температурасын туура жогорулатуу жана денатурация убактысын узартуу.

A-2 Mg²⁺ концентрация

■ Mg²⁺ концентрация өтө жогору —— Mg2+ концентрациясын туура азайтуу: Mg оптималдаштыруу²⁺ оптималдуу Mg аныктоо үчүн 0,5 мм аралыгы менен 1 мМден 3 ммге чейинки реакциялар сериясы аркылуу концентрациялоо²⁺ ар бир шаблон жана праймер үчүн концентрация.

А-3 Термостабилдүү полимераза

■ Ферменттин ашыкча өлчөмү ——Ферменттин көлөмүн туура 0,5 У аралыкта азайтуу.

A-4 Күйүү температурасы

■ Күйгүзүү температурасы өтө төмөн —- Тиешелүү түрдө күйгүзүү температурасын жогорулатыңыз же эки баскычтуу күйүү ыкмасын колдонуңуз

А-5 ПТР циклдери

■ ПТР циклдеринин өтө көп болушу - ПТР циклдеринин санын азайтуу.

С: Жабык же шыбак

A-1 Primer—— начар специфика —— праймерди кайра долбоорлоо, анын өзгөчөлүгүн жогорулатуу үчүн праймердин ордун жана узундугун өзгөртүү; же Киргизилген ПТРди жасаңыз.

A-2 үлгүсү ДНК

—–Калып таза эмес - шаблонду тазалаңыз же ДНКны тазалоочу комплекттер менен бөлүп алыңыз.

A-3 Mg²⁺ концентрация

——Мг²⁺ концентрация өтө жогору —— Мгди туура азайтуу²⁺ концентрация: Mg оптималдаштыруу²⁺ оптималдуу Mg аныктоо үчүн 0,5 мм аралыгы менен 1 мМден 3 ммге чейинки реакциялар сериясы аркылуу концентрациялоо²⁺ ар бир шаблон жана праймер үчүн концентрация.

A-4 dNTP

——ДНТПлардын концентрациясы өтө жогору —ДНТПнын концентрациясын тийиштүү түрдө азайтыңыз

A-5 Күйүү температурасы

——Күйүү температурасы өтө төмөн ——Жуууу температурасын тийиштүү түрдө жогорулатыңыз

A-6 циклдери

——Ото көп цикл ——Циклдин санын оптималдаштыруу

С: 50 мкл ПТР реакция системасына канча шаблон ДНК кошулушу керек?

С: Узун фрагменттерди кантип көбөйтүү керек?

Биринчи кадам - ылайыктуу полимеразаны тандоо. Кадимки Taq полимеразасы 3'-5 'экзонуклеаз активдүүлүгүнүн жоктугунан текшере албайт, жана дал келбөөчүлүк фрагменттердин кеңейтүү эффективдүүлүгүн төмөндөтөт. Ошондуктан, кадимки Taq полимеразасы 5 кбдан чоңураак максаттуу фрагменттерди эффективдүү түрдө күчөтө албайт. Атайын модификациясы же башка жогорку ишенимдүүлүк полимеразасы бар так полимеразасы узартуунун эффективдүүлүгүн жогорулатуу жана узун фрагменттин күчөтүлүшүнүн муктаждыктарын канааттандыруу үчүн тандалышы керек. Мындан тышкары, узун фрагменттерди күчөтүү праймер дизайнын, денатурация убактысын, узартуу убактысын, буфердик рН ж. Калыптын бузулушуна жол бербөө үчүн, 94 ° С денатурация убактысы циклде 30 сек же андан азга чейин кыскартылышы керек, ал эми күчөтүүдөн мурун температураны 94 ° Сге чейин көтөрүү убактысы 1 мүнөттөн аз болушу керек. Мындан тышкары, узартуу температурасын болжол менен 68 ° Сге орнотуу жана узартуу убактысын 1 кб/мин ылдамдыгына ылайык долбоорлоо узун фрагменттердин эффективдүү күчөтүлүшүн камсыздай алат.

С: ПТРдин күчөтүү ишенимдүүлүгүн кантип жакшыртуу керек?

ПТРди күчөтүүнүн каталык ылдамдыгы ар кандай ДНК полимеразаларын жогорку ишенимдүүлүк менен азайтууга болот. Буга чейин табылган бардык Taq ДНК полимеразаларынын ичинен Pfu ферментинин эң төмөнкү ката ылдамдыгы жана эң жогорку ишенимдүүлүгү бар (тиркелген таблицаны караңыз). Фермент тандоодон тышкары, изилдөөчүлөр реакция шарттарын оптималдаштыруу аркылуу ПТР мутация ылдамдыгын андан ары төмөндөтө алышат, анын ичинде буфердик курамды оптималдаштыруу, термостабилдүү полимеразанын концентрациясы жана ПТР циклинин санын оптималдаштыруу.

Кабарыңызды бул жерге жазыңыз жана бизге жөнөтүңүз

Продукт категориялары

ЭМНЕ ҮЧҮН БИЗДИ ТАНДАЙСЫН

Ал түзүлгөндөн бери, биздин фабрика принципти сактоо менен биринчи дүйнөлүк класстагы продуктыларды иштеп чыгууда
биринчи сапат. Биздин өнүмдөр жаңы жана эски кардарлардын арасында индустрияда эң сонун кадыр -баркка ээ болду.

СУРОО